摘要: 目的构建表达人血管内皮生长因子165基因（hVEGF165）的四环素调控重组腺病毒,并测定其在原代培养大鼠成肌细胞的表达水平。方法亚克隆hVEGF165全长cDNA到穿梭质粒pTREShuttle2,获得四环素可调控的目的基因表达盒;亚克隆表达盒到BDAdeno-XTMViralDNA,获得重组腺病毒质粒;重组质粒转染HEK293细胞以包装产生具有感染能力的重组腺病毒颗粒AdTRE.VEGF165。hVEGF165重组腺病毒和Tetoff调节病毒共感染原代培养的成肌细胞,酶联免疫法检测目的基因的表达。结果成功构建了能表达hVEGF165的四环素调控的重组腺病毒载体。hVEGF165重组腺病毒（20pfu/cell）和Tetoff调控病毒（20pfu/cell）共感染骨骼肌成肌细胞后5d,ELISA检测显示培养上清中VEGF165蛋白浓度显著高于未感染的细胞培养上清（14.80±1.15ng/ml）×105/（cell·24h）vs（1.39±0.36ng/ml）×105/（cell·24h）,P<0.01)。结论四环素调控表达的腺病毒系统可高效地转导VEGF基因进入哺乳动物细胞;原代培养的骨骼肌成肌细胞感染AdTRE.VEGF165后可高水平地分泌VEGF165蛋白。